產品(pin)屬(shu)性：

需(xu)要而(er)未提供的試劑和器材(cai)：

1. 產品(pin)僅用于科(ke)研(yan)標準規格酶標儀(yi)

2. 高速離心機

3. 電(dian)熱恒溫培養箱(xiang)

4. 干(gan)凈的試管和Eppendof管

5. 系(xi)列可調節移液器(qi)及吸頭，一次檢測樣(yang)品較多時，用多通道移液器(qi)

6. 蒸餾(liu)水(shui)，容量瓶等。

標本(ben)要求：

1．標本(ben)采集后(hou)盡(jin)早進(jin)行提(ti)取，提(ti)取按相關文獻進(jin)行，提(ti)取后(hou)應(ying)盡(jin)快進(jin)行實(shi)驗。若(ruo)不能馬上進(jin)行試驗，可將(jiang)標本(ben)放于-20℃保存，但應(ying)避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制(zhi)辣(la)根過氧化物(wu)酶的（HRP）活性。

備試劑與(yu)收集血樣：

1.  收集標本(ben)：血清(qing)、血漿(jiang)（EDTA 、檸檬酸(suan)鹽、肝(gan)素(su)抗凝）、細胞培(pei)養上清(qing)液、組織(zhi)勻漿(jiang)等盡早檢(jian)測， 2-8 ℃ 保存(cun)48 小時(shi)；更長(chang)時(shi)間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存(cun)，避免反復凍融。

2.  標(biao)(biao)準(zhun)品液配制(zhi)：使用前加(jia)(jia)入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成(cheng) 120 0ng/ml 的溶(rong)液 。 設標(biao)(biao)準(zhun) 管(guan)(guan) 8 管(guan)(guan)，管(guan)(guan)加(jia)(jia)標(biao)(biao)本(ben)稀釋(shi)液 900ul ，第(di)(di)二至(zhi)第(di)(di)八(ba)管(guan)(guan)加(jia)(jia)入標(biao)(biao)本(ben)稀釋(shi)液 500ul 。在管(guan)(guan)中加(jia)(jia)入 120 0ng/ml 的標(biao)(biao)準(zhun)品溶(rong)液 100ul 混勻后(hou)用加(jia)(jia)樣器吸(xi)出(chu) 500ul ，移至(zhi)第(di)(di)二管(guan)(guan) 。如此反復作對(dui)倍(bei)稀釋(shi)，從(cong)第(di)(di)七 管(guan)(guan) 中吸(xi)出(chu) 500ul 棄去(qu)。第(di)(di)八(ba) 管(guan)(guan) 為(wei)空(kong)白對(dui)照。

3.  10× 標(biao)本(ben)稀(xi)釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀(xi)釋（ 示例： 1ml濃(nong)稀(xi)釋液 +9ml 蒸餾水）。

4.  洗(xi)(xi)滌液(ye)：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗(xi)(xi)滌液(ye)加入 19ml 的(de)重蒸水）

檢測(ce)程序：

1.  加(jia)樣：每孔各(ge)加(jia)入標準品或(huo)待測樣品 100ul ，將(jiang)反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘(zhong)。

2.  洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次，向(xiang)濾紙上印(yin)干。

3.  每(mei)孔中加入(ru)抗(kang)體工作(zuo)液10 0ul 。將反應板充(chong)分(fen)混勻后置(zhi) 37 ℃ 6 0 分(fen)鐘(zhong)。

4.  洗板(ban)：同前(qian)。

5.  每孔(kong)加酶標抗體工作液100ul 。將反應(ying)板置 37 ℃ 3 0 分鐘(zhong)。

樣本(ben)實(shi)驗(yan)前準備(bei)：

ELISA進口試劑盒液(ye)體樣(yang)本：包括血清(qing)、血漿、尿(niao)液(ye)、胸腹水、腦脊液(ye)、細胞培養上(shang)清(qing)等(deng)。

（1）血清

室溫血液自然(ran)凝固10-20分(fen)鐘后(hou)，離心20分(fen)鐘左右(you)（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收集上清(qing)。保存過程中如有沉淀形(xing)成，應再次(ci)離心。

（2）血漿：

應根據標(biao)本的(de)要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作(zuo)為(wei)抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收(shou)集上清。保(bao)存(cun)過程(cheng)中如有(you)沉淀形成，應再次離心。

（3）尿液：

用無菌管收(shou)集。離(li)心20分(fen)鐘左右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細(xi)收(shou)集上清。保存過(guo)程(cheng)中(zhong)如有沉(chen)淀形成，應再(zai)次(ci)離(li)心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

（4）細胞培養上清：

檢(jian)測分泌性的成(cheng)份時(shi)，用(yong)無菌管(guan)收(shou)集(ji)。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收(shou)集(ji)上清。

（5）培養細胞

檢(jian)測細(xi)胞(bao)內(nei)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀(xi)釋細(xi)胞(bao)懸液，細(xi)胞(bao)濃度達到(dao)100萬/ml左右(you)。通過反復(fu)凍融或加入(ru)組織(zhi)蛋白萃取試劑，以使細(xi)胞(bao)破壞并放出細(xi)胞(bao)內(nei)成份。離心20分(fen)鐘(zhong)左右(you)（2000-3000轉/分(fen)）。仔(zi)細(xi)收(shou)集上(shang)清。保存(cun)過程中如有沉淀形成，應再次離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅(xun)速冷(leng)凍(dong)保存(cun)備(bei)用。標本融化后仍然保持(chi)2-8℃的溫(wen)度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織(zhi)蛋白萃取試劑, 用手工或勻(yun)漿(jiang)(jiang)器將標本勻(yun)漿(jiang)(jiang)化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔(zi)細收集上清。分裝后一份(fen)待檢(jian)測(ce)，其余冷(leng)凍(dong)備(bei)用。

Phospho-ATP1A1 (Ser16)    磷(lin)酸化(hua)鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體

Acetyl CoA Carboxylase    乙酰(xian)羧化酶抗(kang)體

Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78)    磷酸化乙酰(xian)羧化酶抗(kang)體

Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)    磷(lin)酸化(hua)Ack1抗(kang)體(ti)

phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)    磷酸化(hua)(hua)腺苷單(dan)磷酸活(huo)化(hua)(hua)蛋白激(ji)酶(mei)α1抗體

phospho-AMPK beta 1 (Ser108)    磷酸化腺苷(gan)單磷酸活化蛋白激酶β1抗體

phospho-ALK (Tyr1604)    磷酸化間變型(xing)淋巴(ba)瘤激酶抗體

phospho-ATM(Ser1981)    磷酸(suan)化(hua)毛細血(xue)管(guan)擴張性共(gong)濟失(shi)調癥突變蛋白抗體

phospho-ATP citrate lyase (Ser455)    磷酸化三(san)磷酸腺檸(ning)檬(meng)酸裂(lie)解酶(mei)抗(kang)體

phospho-ATR (Ser428)    磷(lin)酸化ATR抗體

AMN1    細胞核重定(ding)位及紡錘體(ti)檢查點蛋白AMN1抗體(ti)

ALG11    天連(lian)接糖(tang)基化11抗體

ASF1A    細(xi)胞衰(shuai)老(lao)相(xiang)關蛋白ASF1A抗體(ti)

AGPHD1    氨基(ji)糖苷類(lei)磷酸結(jie)構域蛋白(bai)抗(kang)體

ASGPR1    唾液酸(suan)糖蛋白受體1抗體

ARSF    芳(fang)香基硫酸酯(zhi)酶F抗體    NE-B重酒(jiu)石酸ISA試劑盒    NE-B ELISA Kit    48T/96T

TAF腫瘤血管生長因(yin)子ELISA試劑盒    TAF ELISA Kit    48T/96T

TAA腫瘤相關抗原ELISA試劑盒(he)    TAA ELISA Kit    48T/96T

TSTA腫瘤特異(yi)性移植抗原ELISA試劑盒    TSTA ELISA Kit    48T/96T

TSGF腫瘤特(te)異性生長(chang)因子ELISA試劑盒    TSGF ELISA Kit    48T/96T

TSA腫瘤(liu)特異(yi)性抗原ELISA試劑盒    TSA ELISA Kit    48T/96T

TGSF腫(zhong)瘤(liu)特(te)異生長因(yin)子/腫(zhong)瘤(liu)相關因(yin)子ELISA試劑盒(he)    TGSF ELISA Kit    48T/96T

TNFAIP6腫瘤壞死因子誘(you)導基因6蛋白ELISA試(shi)劑盒    TNFAIP6 ELISA Kit    48T/96T

TWEAK腫瘤壞死因子(zi)相關弱(ruo)凋亡誘導因子(zi)ELISA試劑盒    TWEAK ELISA Kit    48T/96T

TRANCE腫瘤壞死因子相(xiang)關激活誘(you)導(dao)因子ELISA試劑盒    TRANCE ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子(zi)相關凋亡誘導配體(ti)受體(ti)3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R2/DR5腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受(shou)體2ELISA試劑盒    TRAIL-R2 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R4腫瘤(liu)壞死因子相關凋亡誘導配體4ELISA試劑盒    TRAIL-R4 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子相關(guan)凋亡誘導配體3ELISA試(shi)劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R1腫瘤(liu)壞死因子相關凋(diao)亡誘導(dao)配體(ti)1ELISA試劑盒    TRAIL-R1 ELISA Kit    48T/96T

TRAF6腫(zhong)瘤壞死因子受體相(xiang)關因子6ELISA試(shi)劑盒    TRAF6 ELISA kit    48T/96T

TRAF1腫瘤(liu)壞(huai)死因子受體相(xiang)關因子1ELISA試劑盒    TRAF1 ELISA kit    48T/96T

TNFRSF18腫瘤壞死(si)因子受(shou)體超家族成員18ELISA試劑盒    TNFRSF18 ELISA KIT    48T/96T

TNFsR-Ⅱ腫(zhong)瘤壞死因(yin)子可溶性受體ⅡELISA試劑盒    TNFsR-Ⅱ ELISA Kit     48T/96T

TNFsR-Ⅰ腫瘤壞死因子可溶性受(shou)體ⅠELISA試劑盒    TNFsR-ⅠELISA Kit     48T/96T

TL1A/TNFSF15腫(zhong)瘤壞死因(yin)子(zi)超家族(zu)15ELISA試劑(ji)盒    TL1A/TNFSF15 ELISA Kit    48T/96T

TBA總膽汁酸ELISA試劑盒腫瘤壞死(si)因子γELISA試(shi)劑盒    TNFγ ELISA Kit    48T/96T

TNFβ腫瘤壞死因(yin)子βELISA試劑盒    ;TNFβ ELISA Kit    48T/96T

TACE腫瘤壞(huai)死因子α轉化酶(mei)ELISA試劑盒(he)    TACE ELISA Kit    48T/96T

操作步驟(zou)：

1.標準(zhun)品(pin)的(de)稀釋(shi)：本試(shi)(shi)劑盒提供(gong)原倍標準(zhun)品(pin)一支(zhi)，用戶(hu)可按照下列圖表(biao)在小(xiao)試(shi)(shi)管中進行稀釋(shi)。

2.加樣(yang)(yang)(yang)(yang)：分別設空(kong)白(bai)孔（空(kong)白(bai)對照孔不(bu)加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)及酶標(biao)試(shi)劑，其余各(ge)步操作相同）、標(biao)準孔、待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔。在酶標(biao)包被板(ban)上標(biao)準品(pin)準確(que)加樣(yang)(yang)(yang)(yang)50μl，待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)孔中先(xian)加樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)稀釋液(ye)40μl，然(ran)后再(zai)加待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)最終稀釋度(du)為5倍）。加樣(yang)(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)加于酶標(biao)板(ban)孔底部，盡量不(bu)觸(chu)及孔壁，輕輕晃(huang)動混勻。

3.溫育(yu)：用(yong)封板膜封板后置37℃溫育(yu)30分鐘。

4.配液：將(jiang)30倍(bei)濃縮洗(xi)滌液用(yong)(yong)蒸餾(liu)水(shui)30倍(bei)稀釋后備用(yong)(yong)。

5.洗滌(di)：小(xiao)心揭掉封板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩干，每孔加滿(man)洗滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒后棄(qi)去(qu)，如此重復5次，拍干。

6.加酶(mei)：每(mei)孔加入酶(mei)標試劑50μl，空(kong)白(bai)孔除外。

7.溫育：操作同(tong)3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯(xian)色(se)(se)：每孔先加入顯(xian)色(se)(se)劑A50μl，再加入顯(xian)色(se)(se)劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)(se)15分(fen)鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍(lan)色立(li)轉黃色）。

11. 測(ce)定(ding)：以空(kong)白(bai)空(kong)調零，450nm波長依序測(ce)量(liang)各孔的吸(xi)光度（OD值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加終止液后15分鐘以內進行。