操作步驟：

  RIPA 裂(lie)解液 ( 強(qiang) )00mL哪里(li)有賣切取含(han)有目的DNA 片段的瓊(qiong)脂糖凝膠(jiao)條帶(dai)。

   ● 盡(jin)量(liang)切除不含(han)有(you)目(mu)的DNA 部分的凝膠(jiao)，減少凝膠(jiao)體積，提高DNA 回收率。

   ● 切膠(jiao)時，請(qing)使用長(chang)波長(chang)UV  （360 nm ）光盒。且(qie)不要將DNA 長(chang)時間暴(bao)露在紫(zi)外燈下，以(yi)防DNA 損傷。

2  稱(cheng)取凝膠的重量近似地確定其體積。

   ● 凝膠重(zhong)量(liang)的(de)(de)(de)稱(cheng)量(liang)方法：取.5 ml 離(li)(li)心(xin)管(guan)電子天平稱(cheng)初質量(liang)，切(qie)膠裝在離(li)(li)心(xin)管(guan)后稱(cheng)終質量(liang)，兩(liang)者差(cha)即為膠的(de)(de)(de)質量(liang)。不(bu)同離(li)(li)心(xin)管(guan)的(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)可能有差(cha)異，因(yin)此，每(mei)個(ge)離(li)(li)心(xin)管(guan)的(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)需單獨(du)稱(cheng)量(liang)。

3  按(an)照每00 mg 瓊脂糖(tang)凝膠對(dui)應00 µl 溶液BD 的比例，向離心管中(zhong)加入溶液BD。

4  50 ℃水浴(yu)7-0min，直至(zhi)凝膠(jiao)*溶(rong)化。期(qi)間需要振蕩混合3 次。

   ● 瓊(qiong)脂(zhi)糖必須*融化，以免(mian)堵(du)塞柱子，嚴(yan)重影響(xiang)DNA 段(duan)的回(hui)收效率。

   ● 如(ru)果(guo)總(zong)體積(ji)大于500 µl，可適當增加溶膠時間。

   ● 若此時(shi)溶液變紅，可加0 µl 3M NaAC  （pH 5.2）。

5  將步驟4 所獲溶液置于(yu)DNA 純化柱中，靜置2min 。

   ● 膠(jiao)塊*溶解后將膠(jiao)溶液(ye)溫度(du)降至室溫再上柱，因為純化柱在(zai)較高溫度(du)時結合DNA  的能力較弱。

6  2,000 rpm 離(li)心(xin)(xin)min。若(ruo)溶液(ye)量(liang)大于(yu)DNA 純化柱(zhu)的(de)容積，可分(fen)兩次離(li)心(xin)(xin)，棄濾液(ye)。

   ● 此時DNA 被吸附于DNA 純化柱(zhu)中的硅膠膜上(shang)。

7  加(jia)入500 µl 溶(rong)液BD。2,000 rpm,  離心(xin)min，棄濾(lv)液

8  加入500 µl 溶液(ye)(ye)PE。2,000 rpm,  離(li)心min，棄濾液(ye)(ye)。

   ● 溶液(ye)PE 初次使用前(qian)用無水乙醇按(an): 4 稀釋，即含80% 乙醇。

   ● 此(ci)步驟的作(zuo)用是將硅膠膜上吸附(fu)的蛋白、鹽等雜質(zhi)洗脫，以獲得高質(zhi)量DNA 段。

9  加入500 µl 溶液PE。2,000 rpm,  離心min，棄濾液。

0 2,000 rpm 離心  3min ，以*去除純化(hua)柱中的液(ye)體。

   ● 此步驟的(de)作用是去除殘留(liu)乙醇，避免殘留(liu)乙醇影響后(hou)續酶促(cu)反應。同(tong)時(shi)也利于DNA 段的(de)充(chong)分溶解(jie)。

  將離心柱置于新的(de).5 ml 離心管中。向純化(hua)柱的(de)處(chu)，懸空滴加(jia)30-00 µl 溶液Eluent  （60℃預熱），靜置2min 。2,000 rpm  離心min，管底即為目(mu)的(de)DNA 段。貯存于-20℃。

   ● 溶液(ye)Eluent 可用無菌雙(shuang)蒸水代替(ti)，但(dan)其pH 需(xu)為8.0-8.5，加入體積(ji)視DNA 目(mu)(mu)的(de)(de)段的(de)(de)多(duo)少、用戶對目(mu)(mu)的(de)(de)濃(nong)度(du)要求而定。

   ● 對(dui)溶液Eluent 60℃預熱，會提(ti)高提(ti)取(qu)DNA 目的(de)段(duan)的(de)產(chan)量。