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產品名稱：小鼠腎小球內皮細胞
英(ying)文簡(jian)稱：MGECs細胞

貨號：LZ-X969980
規格(ge)：T25
生長特性：貼(tie)壁

凍存培養基(ji)：
凍(dong)存細胞時必須使用推薦的凍(dong)存培養(yang)基(ji)。凍(dong)存培養(yang)基(ji)中(zhong)應(ying)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞(bao)凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞(bao)的(de)即用型*凍存培養基，其所含胎牛血清和(he)牛血清比例經過優化，可改善細胞(bao)活(huo)力以及(ji)解凍后(hou)的(de)細胞(bao)復蘇效果。 
2）凍(dong)存(cun)培養(yang)基是一種化學成(cheng)分(fen)確定的(de)、無蛋(dan)白(bai)、無菌(jun)凍(dong)存(cun)培養(yang)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xi)(xi)胞(bao)和原代細(xi)(xi)胞(bao) (黑色素細(xi)(xi)胞(bao)除外) 的(de)凍(dong)存(cun)。
培養細胞凍(dong)存方案：
以(yi)下(xia)實(shi)驗(yan)方案介紹了培養細胞(bao)凍存(cun)的(de)一般流程。詳(xiang)細的(de)實(shi)驗(yan)方案，必須參閱針(zhen)對具體細胞(bao)的(de)產品說明書。 
1.配(pei)制(zhi)凍存(cun)培養(yang)基，于2°C至8°C下儲存(cun)，直至使用。請注(zhu)意使用何種凍存(cun)培養(yang)基取決于所用細胞(bao)系。
2.凍存貼壁細(xi)胞(bao)時，利用(yong)(yong)傳代時所(suo)用(yong)(yong)方法輕(qing)柔地使細(xi)胞(bao)從組織(zhi)培養容器上脫離下(xia)來。用(yong)(yong)該細(xi)胞(bao)所(suo)需*培養基重新懸浮細(xi)胞(bao)。
3.采用、細(xi)(xi)(xi)胞計數儀(yi)按照臺(tai)盼藍拒(ju)染法或者使用自動(dong)細(xi)(xi)(xi)胞計數儀(yi)測定(ding)總細(xi)(xi)(xi)胞數和活細(xi)(xi)(xi)胞百分比。根(gen)據(ju)所需活細(xi)(xi)(xi)胞密度，計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘(zhong)。在(zai)無菌條件下小心倒掉上清液，不(bu)要攪動(dong)細胞沉淀(dian)。
注(zhu)：離心速(su)度和時間取決于細胞(bao)種類。
5.用預(yu)冷的凍存培(pei)養(yang)基重新(xin)懸浮(fu)細(xi)胞沉淀(dian)，將其(qi)調整至該細(xi)胞適(shi)合的活細(xi)胞密(mi)度(du)。
6.將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液分裝(zhuang)(zhuang)到若干凍(dong)存管(guan)中。分裝(zhuang)(zhuang)時，應不時輕輕混合(he)細(xi)胞，使其保(bao)持均勻(yun)的細(xi)胞懸(xuan)液狀態。
7.使(shi)用可(ke)控制降溫(wen)速度(du)的冷(leng)凍(dong)(dong)裝(zhuang)(zhuang)置(zhi)冷(leng)凍(dong)(dong)細胞，使(shi)溫(wen)度(du)每分(fen)鐘大約降低(di)  1°C。或者，將裝(zhuang)(zhuang)有細胞的凍(dong)(dong)存(cun)管放入凍(dong)(dong)存(cun)盒中，然后將凍(dong)(dong)存(cun)盒置(zhi)于(yu)-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好(hao)的RPMI1640培養液(ye)1瓶(ping)(ping)；8ml小牛血清（FCS) 1瓶(ping)(ping)；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶(ping)(ping)；PBS(-)1 瓶(ping)(ping) 
2. 100ml滅菌(jun)燒(shao)杯2個；
3、50ml離心筒(tong)2個 
4、滅菌培(pei)養(yang)皿1個，細胞培(pei)養(yang)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液(ye)器(qi)各(ge)1支；槍頭(tou)盒2個；無(wu)菌(jun)玻璃攪(jiao)拌棒1個 
6、細胞計數(shu)板1塊(kuai)； 
7、滅(mie)好菌(jun)的鑷子(zi)1把，剪刀1把； 
8、酒精(jing)燈1臺；

實驗報告：
一、分(fen)離與培養：
   1、無菌條件(jian)下，取出1-3d 齡(ling)SD大(da)鼠心房(fang)組(zu)(zu)織，然后(hou)(hou)用PBS將(jiang)此組(zu)(zu)織塊清(qing)洗2次，最后(hou)(hou)將(jiang)組(zu)(zu)織剪(jian)成(cheng)1mm3左(zuo)右(you)大(da)小；
   2、往組織塊中加(jia)入4 mL酶(mei)消(xiao)化液（0.1% 胰酶(mei)和0.1% I型(xing)膠原酶(mei)），混懸10s，置37℃條件下消(xiao)化10min，之后用滴管吹打制成(cheng)單細胞(bao)懸液，自然沉淀并(bing)收集上清(qing)，用含(han)10% FBS培養基終(zhong)止消(xiao)化后4℃放(fang)置；
   3、剩下的組織再加入(ru)3～4mL酶(mei)消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)，混懸10s，置(zhi)37℃消(xiao)(xiao)化(hua)10 min后，按上(shang)述(shu)方(fang)法(fa)收集上(shang)清并終止消(xiao)(xiao)化(hua)后4℃放置(zhi)，重復此步(bu)驟2-3次(ci)，直至組織*被消(xiao)(xiao)化(hua)；
   4、用(yong)200目不銹鋼篩網過濾細胞消化(hua)液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用(yong)含有(you)10％ FBS DMEM/F12培(pei)養基混懸(xuan)，接(jie)種于25cm2培(pei)養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培(pei)養箱中培(pei)養；
   5、差速貼壁(bi)1h后，吸出培(pei)養基(ji)，按實驗需要接種于6孔(kong)板中繼續(xu)培(pei)養；
二、免疫(yi)熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞(bao)生長至(zhi)80%融合時，棄(qi)去培養基，用溫(wen)育的PBS沖洗細胞(bao)2次，每次10min，然后(hou)用4%多聚甲醛在室(shi)溫(wen)條件(jian)下固定細胞(bao)15min；
   2、PBS沖洗細胞2次(ci)，每(mei)次(ci)10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞(bao)2次，每次10min，然后在(zai)室(shi)溫條件下，用(yong)4% BSA封閉細胞(bao)30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一(yi)抗，然(ran)后將其放在4℃冰(bing)箱中孵育細胞過(guo)夜(ye)；
   5、PBS沖洗細(xi)胞3次(ci)，每(mei)次(ci)10min，按(an)1：150的比例(li)稀釋(shi)抗α-actin的二抗， 37℃條件下(xia)放置(zhi)1h；
   6、用PBS沖洗3次，每(mei)次10min，最后(hou)在(zai)倒(dao)置熒(ying)光顯微(wei)
鏡下觀察圖像并拍(pai)照。

Sorensen磷(lin)酸緩(huan)沖液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)(-)-Epigallocatechin Gallate；表沒食子兒茶素沒食子酸酯縮酶(mei)（ADOLASE）活性比色法定量(liang)檢(jian)測試劑盒

Sorensen磷(lin)酸(suan)(suan)緩(huan)沖液(ye)(1×,pH6.2)(-)-Epigallocatechin Gallate；表沒食子兒茶素沒食子酸(suan)(suan)酯染色質(zhi)免疫沉淀分析(xi)（CHIP）試劑盒

Sorensen磷(lin)酸(suan)緩沖液(10×,pH6.2)Epimedin A；朝藿定A染色質免疫沉淀(dian)分析(xi)（CHIP）*試劑盒（包括抗體）

TBS緩沖液(0.02mol/L,pH8.2)Epimedin A；朝(chao)藿定A人(ren)類(lei)巨病(bing)蛋白(bai)酶（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法定量檢測試劑(ji)盒(he)

TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)Epimedin B；朝藿定(ding)B人體鼻病（rhinovirus）定(ding)量(liang)PCR擴增檢測試劑盒

Tris-Maleate緩沖液(0.1mol/L,pH5.08-8.45)Epimedin B；朝(chao)藿定B人(ren)體鼻(bi)病（rhinovirus）定性(xing)檢(jian)測試劑盒

Tris-Maleate緩沖液(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝藿定(ding)C人體腺病（adenovirus）定(ding)量(liang)PCR擴增檢測試劑盒

Tris-Maleate緩沖液(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝藿定C人體(ti)腺病(bing)（adenovirus）定性檢測試劑(ji)盒

阿拉伯膠水溶液(ye)(10%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體形態染色試劑盒

阿拉伯膠水溶液(25%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體型酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒

緩(huan)沖液(5×,pH7.4)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩沖液(pH7.4)Erythromycin；紅霉素溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性染色試劑盒

鈉溶液(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE）總活性比色法定量檢測試劑盒

鈉(na)溶液(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶I（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE I）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩(huan)沖(chong)液(0.1mol/L,pH8.6)Estradiol；β-雌二肉堿棕櫚酰轉移酶II（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE II）活性比色法定量檢測試劑盒
MGECs細胞XII B組磷脂(zhi)酶(mei)A2(PLA2G12B)酶(mei)聯免疫(yi)吸附測定試劑盒(he)Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit人瘤病16型E7抗體

髓系觸發受體-1(TREM-1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB1 ELISA Kit人類狀瘤病58 E6蛋白抗體

黑素轉鐵蛋白(bai)(MFI2)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit人類狀瘤病16抗體

抗酸性(xing)磷酸酶(ACP5)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SBDS ELISA Kit人類狀瘤病18 E7抗體

甲狀腺原氨酸(Thyronine)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SA1 ELISA Kit人類狀瘤病31 E7抗體

脂(zhi)聯素(ADP/Acrp30)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SCAP ELISA Kit轉錄因子HES2抗體

集聚蛋白(AGRN)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SAPS3 ELISA Kit轉錄因子HES3抗體
注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復(fu)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響(xiang)，但為取得良好的(de)使用效果，3-6個月(yue)內(nei)推(tui)薦4℃保存，并適(shi)當注(zhu)意(yi)避免(mian)反復(fu)凍融。
     如果(guo)(guo)有細菌或真菌污染，會(hui)嚴重(zhong)影響檢測效果(guo)(guo)。
     染色后宜盡快檢(jian)測，時間過長可能會(hui)導致(zhi)凋亡或壞死細胞的數(shu)量增加。
     如(ru)果(guo)細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法(fa)去除殘留(liu)的(de)(de)胰酶。殘留(liu)的(de)(de)胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dao)致(zhi)染色失敗。
     熒光物質均易發生(sheng)淬滅，在(zai)進行熒光觀(guan)察時(shi)，盡量縮短觀(guan)察時(shi)間，同時(shi)在(zai)操作和存放過程中也盡量注意(yi)避光保存。
     用(yong)于流式細(xi)胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的(de)PI假陽性細(xi)胞，并且通過調整相關設置(zhi)和參數也無法(fa)改(gai)善，可以(yi)用(yong)PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常(chang)可以(yi)有效(xiao)減少假陽性的(de)壞死(si)細(xi)胞。
     需自備PBS。
     本產品于(yu)專業(ye)人員的科學(xue)研究用，不(bu)得(de)用于(yu)臨床診斷或(huo)治(zhi)療，不(bu)得(de)用于(yu)食品或(huo)藥品，不(bu)得(de)存放(fang)于(yu)普(pu)通住宅內。
     為了您的安全和健康(kang)，請穿(chuan)實驗服并(bing)戴一次性手套操(cao)作。